MiPure Cell/Tissue miRNA Kit( 离心柱型)
细胞/组织miRNA提取试剂盒
动物组织/细胞miRNA提取;产物可用于芯片分析;Northern杂交;RT-PCR;miRNA文库构建
· miRNA 提取效率高,起始量范围广
· 大分子RNA及基因组DNA残留更少
· 操作简便,兼容性强
图1
使用MiPure Cell/Tissue miRNA Kit与Total RNA提取试剂(如Trizol)分别从等量样本(细胞或小鼠肝脏组织)中提取miRNA、Total RNA,琼脂糖凝胶电泳检测等量产物,结果如图所示:对于细胞或小鼠组织,MiPure Cell/Tissue miRNA Kit提取得到的产物中不含有大分子RNA,如18S、28S RNA。
图2
通过qPCR实验检测等量产物中miR-16基因,结果显示,MiPure Cell/Tissue miRNA Kit对于小片段RNA(包含miRNA)的提取产量优于Trizol法。
MiPure Cell/Tissue miRNA Kit是基于硅胶柱吸附法开发的miRNA提取分离试剂盒,能有效提取长度20 nt-200 nt的小片段RNA,包括miRNA、siRNA 等。高效的裂解液能轻松裂解各种动物组织和细胞,减少蛋白和杂质对产物的干扰,优化的硅胶吸附填料高效去除基因组DNA和大分子RNA,保证产物的高产量和高质量。试剂盒适合于从<5 x 106真核培养细胞,<100 mg 动物组织提取小分子RNA,得到的小分子RNA可直接用于芯片分析,Northern杂交,RT-PCR等。试剂盒也可用于提取总RNA,>200 nt 的大分子RNA,满足客户的不同需求。
Box 1:4℃避光保存
Box 2:室温保存
Q1:RC201离心后分层现象不明显是什么原因导致的
A1:(1)未添加氯仿或氯仿不纯:确保加入氯仿,氯仿不含有异戊醇或其它添加成分;
(2)加入氯仿后混匀效果不好:加入氯仿后,一定要剧烈振荡混匀15 sec。颠倒混匀或短时间涡旋混匀,会导致分离不明显或引入DNA 污染。如果离心后分层不明显,重复振荡和静置后再次离心;
样品中含有机溶剂:若样品含有有机溶剂如DMSO、乙醇、强碱等试剂会影响分层。
Q2:RNA产量低
A2:(1) 样品匀浆不充分。处理培养细胞时,反复吹打裂解液进行裂解;处理动物组织时,推荐使用机械匀浆器匀浆;
(2) 样品起始用量太少或者太多。根据说明书给出的参考用量及实际情况来决定样品用量;
(3) RNA的洗脱效率低。RNase-free ddH2O没有加到膜上,或洗脱体积不够。可加入预热的30-50 μl RNase-free ddH2O到膜上,室温静置2 min,然后离心洗脱RNA。
Q3:RNA降解
A3:(1) 组织/细胞用量太多。减少样品用量,正确的样品用量是获得理想结果的必要条件;
(2) RNase污染。操作过程避免RNase的污染。戴一次性干净手套;在单独洁净的区域操作;戴口罩并在操作过程中避免讲话。通过以上办法可有效防止实验者汗液、唾液中的RNase污染。使用RNase-free的实验器具,包括枪头和离心管。RNA实验所用器具应专门使用,不可用于其它实验。RNA实验所用试剂都应专用,避免混用后造成交叉污染。RNase-free ddH2O建议分装后保存。
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