2 × Taq Plus Master Mix Ⅱ(Dye Plus)
高产高保真,让DNA扩增更成功
菌落PCR;高产量PCR;基因鉴定;
· 扩增能力强:对于大多数模板和引物,产量明显提高;
· 可视度高:PCR反应结束进行琼脂糖凝胶电泳加样时,样品颜色更加清晰;
· 操作便捷:加入引物和模板即可进行扩增,无需冰上操作,产物含有染料可直接进行电泳;
· 稳定性好:反复冻融50次活性未见明显降低
图1.模板兼容性广
以人基因组DNA、鼠基因组DNA、小麦基因组DNA、水稻基因组DNA、菌液、λDNA分别为模板扩增0.5-15 kb片段,均可得到单一的相应条带,具有广泛的模板兼容性。
图2.扩增能力强
以水稻基因组DNA、HeLa cDNA、小鼠基因组DNA为模板,分别扩增长度为0.5k、1k、3k的目的片段。2×Taq Plus Master Mix Ⅱ(Dye Plus)相比于T公司、Q公司和K公司的Taq Mix产品,具有更强的扩增能力,产量更高,适用范围更广。
1:2×Taq Plus Master Mix Ⅱ(Dye Plus);
2、3、4:分别为三种来自于T公司、Q公司和K公司的Taq Mix产品;
-:阴性对照。
本产品适用于高产量PCR反应,只需加入引物和模板即可进行扩增,可用于10 kb以内以基因组、15 kb以内以质粒和λDNA为模板的PCR扩增。相比于普通PCR,具有更高的保真度、更强的扩增性能和产量。扩增体系中加入了保护剂,反复冻融后仍可保持稳定的活性。本品含有蓝色双染料,可在反应结束后直接进行电泳,使用方便。PCR产物的3’端带A,可直接克隆至T载体,并适用于ClonExpress 快速克隆试剂盒(C112/C113/C115/C601)。
组分 |
P213-01 |
P213-02 |
P213-03 |
2 × Taq Plus Master Mix II(Dye Plus) |
5 × 1 ml |
15 × 1 ml |
50 × 1 ml |
-20°C
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Q1:扩增效率低,实验组无扩增条带。
A1:(1) 引物
检查人工合成的引物是否因存储条件不当而降解;引物设计是否合理,可利用BLAST检查引物特异性或重新设计引物。
(2) 模板
长期放置、反复冻融会导致模板断裂、开环或降解,应使用新鲜制备的DNA双链作为模板;模板GC含量过高会导致DNA的双链无法打开,此时加入PCR Enhancer(货号P021),可以有效降低解链温度;模板的GC含量过低会导致扩增效率较差,可适当延长引物长度或通过梯度PCR摸索合适的反应条件;模板中存在抑制物,特别是甲醛固定及石蜡包埋的组织常含甲酸,会造成DNA脱嘌呤而影响PCR结果,建议稀释使用或重新制备;若模板为cDNA,要确认逆转录所用RNA的纯度及完整度。
(3) 酶
反应所用的酶因保存或运输不当而失活,建议更换新酶或用另一来源的酶重新实验。
(4) 扩增体系
反应体系配制错误,建议重复实验。
(5) 反应程序
检查变性温度是否准确,PCR仪指示温度与实际温度是否相符。如果温度过高,酶在前几个循环就迅速失活;温度过低则模板变性不彻底。可对退火温度设置梯度,摸索合适的退火温度。检测延伸时间是否充足。
(6) Mg2+浓度不合适
Mg2+浓度过低可影响PCR产量甚至使PCR扩增失败;Mg2+浓度过高会降低PCR的特异性,应适当调整Mg2+浓度。
Q2:扩增特异性差,非特异性扩增。
A2:(1) 引物
引物设计不够优化。引物与靶序列有非特异性互补或自身聚合成二聚体,可降低引物浓度进行优化,必要时重新设计引物。
(2) 模板
模板不纯,被污染,需重新制备模板。
模板降解或过量,通过电泳检查模板完整性及浓度,必要时重新纯化模板。模板的使用量请参考说明书。
(3) 反应程序
反应程序不够优化。如果出现比目的条带小的杂带,可通过提高退火温度,降低循环数调整;如果出现比目的条带大的杂带,可缩短延伸时间、降低循环数。
(4) 酶
酶量加入过多。
Q3:扩增产物跑胶条带弥散或拖尾。
A3:(1) 胶
制胶时要使胶完全融化。
(2) 引物
检查人工合成的引物是否因存储条件不当而降解。
(3) 模板
模板降解或过量,可通过电泳检查模板完整性及浓度,必要时重新制备模板。模板的使用量请参考说明书。如果目的条带较长,模板是cDNA,要确认逆转录所用RNA的纯度及完整度,逆转录时不加随机引物重新逆转录。
(d) 反应程序
反应程序不够优化。退火温度不合适,可对退火温度设置梯度,摸索合适的退火温度;尝试Touch Down 程序。
(e) 酶
酶量加入过多。
Q4:空白对照出现扩增产物。
A4:(1) 引物设计不合理
扩增序列与非目的扩增序列有同源性,PCR也可以扩增出非靶序列的序列。
(2) 若扩增产物条带大小与目的条带一致,说明有污染
更换新的Mix、水或引物重复实验。反应体系在超净工作台内配制,减少气溶胶污染。
(3) 为了避免靶序列受到整个基因组或大片段的交叉污染,操作时应小心轻柔,防止将靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外。
(4) 为了避免靶基因受到空气中小片段核酸污染,可用巢式PCR方法减轻或消除污染。
Q5:P213和P212的区别?
从产品形式看:P213含有两条指示条带(二甲苯青和溴酚蓝),试剂为深蓝色;P212含一条指示条带(溴酚蓝),试剂为蓝色。
从产品性能看:P213的产量高于P212。
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